Diabetologia：应答但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到口内自身血清到用到1型号白血病诊断病征的实质性率在老年人时期就有很好的描绘出，多个口内自身血清感染性的老年人当中有70%在血清转换后10天内患上白血病，而随访15年的老年人这一数目提高到84%。相对于之下，占到诊断1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的病症机制还没取得充分的研究者。

越来越多的人开始可用分阶段控制系统来定义1型号白血病的实质性：个质在用到多种口内自身血清时进入第1阶段，用到血糖异常时进入第2阶段，用到病征时进入第3阶段。一些多发口内自身血清感染性的个质，在1期和2期，实质性较很慢，并持续发展为病症的1型号白血病。我们之前描绘出了一分组在首次样品到多种口内自身血清样本后至少10年无白血病的以致于很慢实质性者，这分组患儿人数少，但特征颇为明确。随后，我们发现口内自身肝细胞特异性CD8+T细胞核反应在实质性缓很慢的患儿当中大质不存在，但在近期病症和长期以来存在的白血病患儿当中很容易样品到。这可能表明，与实质性患儿相对于，这些患儿自身免疫反应的适度加强。

早期研究者表明，尽管适度性T细胞核(Treg)数量正常，但白血病患儿存在一些系统缺陷，其当中仅限于对IL-2的反应并能降低。此外，白血病患儿当中的畸变CD4+T细胞核可能对适度以致于富抵抗性，观感为畸变T细胞核的抑止西移动，共存消除的Treg和排泄消除的其会Treg，以及肝细胞历程的CD4+T细胞核当中IL-2反应西移动。本研究者的目的是描绘出了CD4+适度性T细胞核(Treg)在一小群以致于缓很慢实质性者当中的特征，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁以下确诊的患儿亲属当中检查1型号白血病的危险性状况。我们之前描绘出了长期以来缓很慢实质性者的特征，他们保有多重口内自身血清感染性超过10年，但没用到白血病的诊断病征，很慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保有无白血病并不愿发放大量血液样本的缓很慢实质性者纳入T和B细胞核系统分析方法。在目前的研究者当中，8名很慢实质性者(SP分组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身血清感染性。所有的参与者都西北面1型号白血病实质性的1期，尽管一些人随后失去了口内自身血清对某些肝细胞的感染性反应，然而，一名患儿已经西北面2期至少6年，但没用到诊断病征，一名患儿被诊断为白血病，该患者72岁，在采集测试样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法当中对该其会顺利进行了单独风险评估。除去外周血单个核细胞核(PBMCs)，运用于多实例流式细胞核练成和T细胞核抑止试验风险评估其会当中Treg的基频、表型号和系统。可用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)顺利进行无都由聚类分析方法，风险评估Treg表型号。

结果：与健康其会相对于，来自很慢实质性质的清醒CD4+T细胞核的都由聚类看出，激活的清醒CD4+ Treg基频提高，与抗生素其会的TNFR特别蛋白(GITR)强调提高有关。一名HbA1c升高的患儿与实质性缓很慢者和匹配的对照分组相对于，Treg谱并不相同。系统分析方法表明，与健康其会相对于，来自缓很慢实质性质的Treg介导的CD4+畸变T细胞核抑止明显受损。观感为对畸变CD4+T细胞核CD25和CD134强调的抑止提高。

由此可知1 深入的表型号分析方法看出，CD4+Treg亚型号在很慢实质性链表当中提高。由FlowSOM分解成的Treg室，聚集在来自所有其会的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物强调断定出10个元簇:清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)可用9个有所不同Treg标上分解成的10个元簇的MST。每个链表亦然一个坦克部队(100个坦克部队)，来得大的元坦克部队(10个元坦克部队)在链表分组周围上色。每个链表当中的饼由此可知坚称单个标上的强调档次。(b)每个元聚类的热由此可知，以看出整质标上强调。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)分解成由此可知，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于金属量为每个metacluster木箱本站由此可知(金属量> 0.05%)确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核(l)。浅蓝色圆圈亦然慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 可用CITRUS的估测号证实，Treg基频的提高是实质性缓很慢的标志。分级制度门控(a - f)和甜菜分析方法(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群质的标志性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR强调顺利进行除去，模拟FlowSOM群质。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及其会SP 606(浅蓝色)当中CD25+ cd127的基频汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的木箱本站由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)玉米簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调准确度着色，箭头突出的簇被鉴别为SP和HD链表之间的有所不同。(j)木箱本站由此可知看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组当中，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对于金属量(数目)。(k)直方由此可知看出每个簇的表型号(深蓝色)和Treg标上相对于强调与取材强调(深蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。取材与所有其他簇当中标上的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检验

由此可知3 与健康献血者相对于，实质性缓很慢者清醒treg的GITR提高。每个清醒CD4+T细胞核元簇(清醒T细胞核_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个强调标上的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的强调热由此可知(sp606不仅限于在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR强调并联，看出直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon选取符号秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有其会仅限于，p< 0.05(深蓝色)其会SP 606和匹配的HD不仅限于在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR强调，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)并联，看出直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检验

由此可知4 来自缓很慢实质性的CD4+ treg细胞核控制畸变CD4+T细胞核的并能降低。SP分组用深蓝色的本站和圆圈坚称，HD分组用黄色的本站和圆圈坚称，浅蓝色的本站/圆圈坚称其会sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按掩蔽的数目滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，培养出来3翌日顺利进行流式细胞核练成样品。(a-d)与CD4+需要的话者相对于应的treg培养出来(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养出来。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。可用感染性对照(激活的响应细胞核不含treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 畸变CD4+T细胞核对缓很慢实质性的T细胞核重置的抑止来得敏感。SP分组用深蓝色的本站和圆圈坚称，HD分组用黄色的本站和圆圈坚称，浅蓝色的本站/圆圈坚称其会sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按掩蔽的数目滴定。用抗CD3 /28微珠重置细胞核，培养出来3翌日顺利进行流式细胞核练成(CD25反染)和细胞核因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培养出来。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来当中的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自缓很慢实质性子的重置清醒CD4+Treg在GITR强调当中取得了扩张和充沛，强调了全面研究者Treg在1型号白血病可能性个质当中的异质性的必要性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28